3 Procedimiento para la toma de muestra y pasos para la tinción PAP Que es tomar la muestra - Existen distintos tipos de toma de muestra. - Se toma muestra a mitad del ciclo cuando existen células superficiales. Que tipos de toma de muestra existen - Toma de muestra para estudio morfológico o Se la toma de la región escamo columnar. En esta región existen dos tipos de epitelio:  Epitelio Plano Estratificado No Queratinizado  Epitelio Cilíndrico Simple - Toma de muestra para estudio de valoración hormonal en ciclo ovárico o en gestación o En el tercio superior de la pared lateral de la vagina, o El tercio superior lateral de la pared de la vagina es sensible a estímulos hormonales o El tercio superior lateral de la pared de la vagina es la menos afectada por el moco cervical y los detritos. - Toma de muestra para el diagnostico de despistaje de o Lesiones malignas o Lesiones bacteriológicas o Lesiones micológicas y o Lesiones triconomiasicas o El lugar de elección será el fondo del saco posterior de la vagina, que es donde se acumula mayor cantidad de descamación celular. Condiciones desfavorables para la toma de muestra - Menstruación - Inflamación severa - Aplicación de medicamentos - Relaciones sexuales - Cauterizaciones - Crioterapia Como se envían las muestras al laboratorio - Si las muestras se tangan que enviar por correo. o Hacer la toma de muestra o Fijar con laca luego o Colocarlas dentro de valijas delgadas de cartón o Identificarlas o Escribir fecha de la ultima menstruación de la paciente o No se leen placas rotas LA TINCION DE PAPANICOLAU - George Papanocollau la inventó. - Técnica de bajo costo y poco tiempo. - Coloración que abarca un generoso espacio. - Se diferencia núcleo y citoplasma. - Se pueden establecer grados de maduración y diferenciación celular. - El núcleo se tiñe y el citoplasma es transparente. - Es una coloración tricrómica (3 colorantes). - De acuerdo al PH del medio intracelular se reconocen. o células de basófilas o células eosinófilas o células orangeofilas. PROCEDIMIENTO - Se fija para conservar células - Se la realiza tan pronto como se haga la toma de muestra - Se fija el extendido - Los fijadores son o Alcohol – Éter: (alcohol etílico de 90 % y éter de 90%) o Alcohol de 95% (se puede utilizar alcohol metílico o etílico). o Nebulizadores o spray (laca) de cabello (mezcla de alcohol isopropilico fijador y polietilenglicol protector de desecación). o Se pulveriza a una distancia de 25 a 30 centímetros entre la placa y el nebulizador. o Secado al aire (que es un método antiguo y se utiliza para la tinción giemsa) este fijador oxida a la célula y en la actualidad ya no se utiliza. - Hidratación o Ya que los extendidos han sido fijados en alcohol o spray, se debe hidratar para luego teñir con hematoxilina (solución acuosa), o Se hidrata con alcoholes en grado descendente hasta llegar al agua corriente y así eliminar el fijador - Colorante hematoxilina o La solución básica de hematoxilina tiñe el núcleo que tiene componente acido. - Diferenciadores decoloran el citoplasma teñido involuntariamente, luego estos son neutralizados lavando con agua corriente, son diferenciadores de dos tipos o Diferenciador acido es una solución de ácido clorhídrico al 0,25% o Diferenciador básico es una solución de bicarbonato de sodio al 0,25% - Deshidratación se realiza mediante alcoholes en grado descendente, esto permitirá teñir el extendido con colorantes alcohólicos. - Colorante Orange G Tiñe citoplasmas transparentes del estrato superficial, o El colorante Orange G tiene apetencia por la queratohialina o Los alcoholes que siguen coadyuvan para la siguiente coloración alcohólica. - Colorante EA – 50: tiñe o citoplasmas densos o células del estrato profundo, o parasitos (trichomonas) o células que no se hayan teñido - Xilol se debe dejar secar antes de sumergir al alcohol o el alcohol y el xilol reaccionan o el xilol disuelve las grasas del extendido por tanto nos ayuda a una mejor visualización de las células o el xilol conserva el extendido por más tiempo. - Montaje o mantiene hidratadas a las células o tiene un buen índice de refracción. o Se usa resina o bálsamo de Canadá PROCEDIMIENTO PARA LA TINCION a. Toma de muestra b. Hidratación o Alcohol 95% o Alcohol 80%´ o Alcohol 70% o Alcohol 50% c. Lavado (agua corriente) d. Hematoxilina e. Lavado (agua corriente) f. Diferenciadores o Acido o Basico g. Lavado (agua corriente) h. Deshidratacion o Alcohol 50% o Alcohol 70% o Alcohol 80% o Alcohol 95% o Alcohol absoluto i. Orange – G j. Alcoholes absolutos o Alcohol absoluto o Alcohol absoluto k. EA – 50 l. Alcoholes absolutos m. Xilol n. Montaje TEORIAS DE LA COLORACION CELULAR - La elesctroadsorcion es la reacción entre cargas positivas y negativas - Entender el carácter anfótero de las proteínas es de suma importancia. - Tiene mucha importancia el PH - También es importante el punto isoeléctrico de las estructuras a teñir. - La adsorción se lleva a cabo por la tensión superficial , - La adsorción se da por la adherencia de las sustancias a la superficie - No intervienen fuerzas isoelectricas